ⅠNucleic թթուiներածություն
Նուկլեինաթթուն բաժանվում է դեզօքսիռիբոնուկլեինաթթվի (ԴՆԹ) և ռիբոնուկլեինաթթվի (ՌՆԹ), որոնցից ՌՆԹ-ն բաժանվում է ռիբոսոմային ՌՆԹ (rRNA), սուրհանդակ ՌՆԹ (mRNA) և փոխանցող ՌՆԹ (tRNA)՝ ըստ իր տարբեր գործառույթների։ԴՆԹ-ն հիմնականում կենտրոնացած է միջուկում, միտոքոնդրիումներում և քլորոֆորմում, մինչդեռ ՌՆԹ-ն հիմնականում բաշխված է ցիտոպլազմայում։Որպես գեների արտահայտման նյութական հիմք՝ նուկլեինաթթվի արդյունահանումը չափազանց կարևոր դեր է խաղում մոլեկուլային կենսաբանության հետազոտության և կլինիկական մոլեկուլային ախտորոշման մեջ:Նուկլեինաթթվի արդյունահանման կոնցենտրացիան և մաքրությունն ուղղակիորեն կազդեն հետագա ՊՇՌ-ի, հաջորդականության, վեկտորի կառուցման, ֆերմենտների մարսողության և այլ փորձերի վրա:
Ⅱ Նուկլեինաթթվի արդյունահանման և մաքրման մեթոդ
① Ֆենոլի/քլորոֆորմի արդյունահանման մեթոդ
Ֆենոլի/քլորոֆորմի արդյունահանումը ԴՆԹ-ի արդյունահանման դասական մեթոդ է, որը հիմնականում օգտագործում է երկու տարբեր օրգանական լուծիչներ՝ նմուշները մշակելու համար՝ ջրային փուլում լուծելով ԴՆԹ-ի վրա հիմնված նուկլեինաթթուն, օրգանական փուլում լիպիդները և երկու փուլերի միջև ընկած սպիտակուցները:Այս մեթոդն ունի ցածր գնի, բարձր մաքրության և լավ ազդեցության առավելությունները:Թերությունները բարդ վիրահատություն և երկարատև աշխատանք են:
② Տրիզոլ մեթոդ
Տրիզոլ մեթոդը ՌՆԹ արդյունահանման դասական մեթոդ է։Տրիզոլի մեթոդը բաժանվում է ջրային և օրգանական փուլի՝ քլորոֆորմով ցենտրիֆուգումից հետո, որոնցում ՌՆԹ-ն լուծվում է ջրային փուլում, ջրային փուլը տեղափոխվում է նոր EP խողովակ, տեղումներ են ստացվում իզոպրոպանոլի ավելացումից հետո, այնուհետև էթանոլի մաքրումը:Այս մեթոդը հարմար է կենդանիների հյուսվածքներից, բջիջներից և բակտերիաներից ՌՆԹ արդյունահանման համար:
③ Կենտրոնախույս սյունակի մաքրման մեթոդ
Ցենտրիֆուգային սյունակի մաքրման մեթոդը կարող է հատուկ կլանել ԴՆԹ-ն հատուկ սիլիցիումի մատրիցային կլանման նյութերի միջոցով, մինչդեռ ՌՆԹ-ն և սպիտակուցը կարող են սահուն անցնել, այնուհետև օգտագործել բարձր աղի ցածր PH՝ միավորելու նուկլեինաթթուն, ցածր աղով բարձր PH արժեքով էլյուցիան՝ առանձնացնելու և մաքրելու նուկլեինաթթուն:Առավելություններից են մաքրման բարձր կոնցենտրացիան, բարձր կայունությունը, օրգանական լուծիչի կարիքը և ցածր արժեքը:Թերությունն այն է, որ այն պետք է ցենտրիֆուգել քայլ առ քայլ, ավելի շատ գործառնական քայլեր:
④ Մագնիսական ուլունքների մեթոդ
Մագնիսական ուլունքների մեթոդն այն է, որ բջջային հյուսվածքի նմուշը բաժանվի լիզատի միջով, նուկլեինաթթուն ազատվի նմուշում, այնուհետև նուկլեինաթթվի մոլեկուլները հատուկ կլանվեն մագնիսական բշտիկի մակերևույթի վրա, մինչդեռ կեղտերը, ինչպիսիք են սպիտակուցները և շաքարները, մնացին: հեղուկը։Բջջային հյուսվածքի պառակտման, նուկլեինաթթվի հետ մագնիսական ուլունքի կապակցման, նուկլեինաթթվի լվացման, նուկլեինաթթվի էլյուցիայի և այլնի քայլերով վերջապես ստացվում է մաքուր նուկլեինաթթու։Առավելությունները պարզ շահագործումն ու կարճաժամկետ օգտագործումն են՝ առանց փուլային ցենտրիֆուգացման անհրաժեշտության:Այն ունի ցածր տեխնիկական պահանջներ և կարող է իրականացնել ավտոմատ և զանգվածային աշխատանք:Մագնիսական բշտիկի և նուկլեինաթթվի հատուկ համադրությունը արդյունահանված նուկլեինաթթուն դարձնում է բարձր կոնցենտրացիայով և մաքրությամբ:Թերությունն այն է, որ ներկայիս շուկայական գինը համեմատաբար թանկ է։
⑤ Այլ մեթոդներ
Բացի վերը նշված չորս մեթոդներից, կան եռացող ճեղքում, խտացված աղի մեթոդ, անիոնային լվացող միջոց, ուլտրաձայնային մեթոդ և ֆերմենտային մեթոդ և այլն:
Ⅲ Նուկլեինաթթվի արդյունահանման տեսակը
Foregene-ն ունի աշխարհի առաջատար Direct PCR հարթակը, երկսյունակ ՌՆԹ մեկուսացման հարթակ (միայն ԴՆԹ + միայն ՌՆԹ):Հիմնական արտադրանքները ներառում են ԴՆԹ/ՌՆԹ մեկուսացման փաթեթներ, PCR և Direct PCR ռեակտիվների մոլեկուլային լաբորատոր ռեակտիվների շարք:
① Ընդհանուր ՌՆԹ արդյունահանում
Ընդհանուր ՌՆԹ-ի արդյունահանման նմուշները ներառում են արյուն, բջիջներ, կենդանիների հյուսվածքներ, բույսեր, վիրուսներ և այլն: Ընդհանուր ՌՆԹ-ի բարձր մաքրությունը և բարձր կոնցենտրացիան կարելի է ձեռք բերել ընդհանուր ՌՆԹ-ի արդյունահանման միջոցով, որը կարող է օգտագործվել RT-PCR-ի, չիպի վերլուծության, in vitro թարգմանության մեջ, մոլեկուլային կլոնավորում, Dot Blot և այլ փորձեր։
Foregene-ի հետ կապվածՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուներ
Կենդանիների ընդհանուր ՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու--Արագ և արդյունավետ կերպով արդյունահանեք բարձր մաքրության և բարձրորակ ընդհանուր ՌՆԹ տարբեր կենդանիների հյուսվածքներից:
Բջջի ընդհանուր ՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու--Բարձր մաքրված և բարձրորակ ընդհանուր ՌՆԹ-ն կարելի է ստանալ տարբեր մշակված բջիջներից 11 րոպեում:
Բույսերի ընդհանուր ՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու--Արագորեն արդյունահանեք բարձրորակ ընդհանուր ՌՆԹ բույսերի նմուշներից ցածր պոլիսաքարիդների և պոլիֆենոլի պարունակությամբ:
Վիրուսային ՌՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու- Արագորեն մեկուսացրեք և մաքրեք վիրուսային ՌՆԹ-ն նմուշներից, ինչպիսիք են պլազմայից, շիճուկից, բջիջներից զերծ մարմնի հեղուկներից և բջիջների կուլտուրայի վերին նյութերից:
② Գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանում
Գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանման նմուշները ներառում են հող, կղանք, արյուն, բջիջներ, կենդանիների հյուսվածքներ, բույսեր, վիրուսներ և այլն: Գենոմային ԴՆԹ-ի արդյունահանումը կարող է օգտագործվել ֆերմենտների մարսողության, ԴՆԹ գրադարանի կառուցման, ՊՇՌ-ի, հակամարմինների պատրաստման, Western blot հիբրիդացման վերլուծության, գենային չիպի, բարձր - թողունակության հաջորդականություն և այլ փորձեր:
Foregene-ի հետ կապվածԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածուներ
Կենդանական հյուսվածքի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու- Գենոմային ԴՆԹ-ի արագ արդյունահանում և մաքրում բազմաթիվ աղբյուրներից, ինչպիսիք են կենդանիների հյուսվածքները, բջիջները և այլն:
Արյան ԴՆԹ Midi հավաքածու (1-5 մլ)-- Արագ մաքրում է բարձրորակ գենոմային ԴՆԹ-ն հակամակարդելի արյունից (1-5 մլ):
Բուկալային շվաբր/FTA քարտի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու- Արագ մաքրեք բարձրորակ գենոմային ԴՆԹ-ն բուկալային շվաբրի/FTA քարտի նմուշներից:
Բույսերի ԴՆԹ-ի մեկուսացման հավաքածու- Արագ մաքրել և ստանալ բարձրորակ գենոմային ԴՆԹ բույսերի նմուշներից (ներառյալ պոլիսախարիդները և պոլիֆենոլային բույսերի նմուշները)
③ Պլազմիդի արդյունահանում
Պլազմիդը մի տեսակ շրջանաձև փոքր մոլեկուլ ԴՆԹ է բջիջներում, որը ԴՆԹ-ի վերակոմբինացիայի ընդհանուր կրողն է:Պլազմիդի արդյունահանման մեթոդն է՝ հեռացնել ՌՆԹ-ն, առանձնացնել պլազմիդը բակտերիաների գենոմային ԴՆԹ-ից և հեռացնել սպիտակուցը և այլ կեղտեր՝ համեմատաբար մաքուր պլազմիդ ստանալու համար։
General Plasmid Mini Kit- Արագ մաքրել բարձրորակ պլազմիդային ԴՆԹ-ն վերափոխված բակտերիայից սովորական մոլեկուլային կենսաբանական փորձերի համար, ինչպիսիք են փոխակերպումը և ֆերմենտների մարսումը
④ Արդյունահանման այլ տեսակներ, miRNA արդյունահանում և այլն:
Կենդանիների miRNA մեկուսացման հավաքածու- Արագ և արդյունավետ կերպով 20-200nt miRNA-ի, siRNA-ի, snRNA-ի փոքր ՌՆԹ-ի բեկորներ հանել կենդանիների տարբեր հյուսվածքներից և բջիջներից
Ⅳ Նուկլեինաթթվի արդյունահանման և մաքրման արդյունքի պահանջներըs
① Նուկլեինաթթվի առաջնային կառուցվածքի ամբողջականությունն ապահովելու համար:
② Կրճատել սպիտակուցների, շաքարների, լիպիդների և այլ մակրոմոլեկուլների միջամտությունը
③ Չպետք է լինի օրգանական լուծիչ կամ մետաղական իոնների բարձր կոնցենտրացիան, որը կարող է արգելակել նուկլեինաթթվի նմուշների ֆերմենտը:
④ ՌՆԹ-ն և այլ նուկլեինաթթուների աղտոտումը պետք է վերացվի ԴՆԹ-ի արդյունահանման ժամանակ և հակառակը:
Հրապարակման ժամանակը՝ նոյ-24-2022
